Matricea regiuni în greutate


Abstract Pe măsură ce înțelegerea noastră despre neurobiologie a progresat, analizele moleculare sunt adesea efectuate pe zone mici ale creierului, cum ar fi cortexul prefrontal medial MPFC sau nucleul accumbens.

Provocarea în această lucrare este de a diseca zona corectă, păstrând în același timp micromediul care urmează să fie examinat.

matricea regiuni în greutate pierderea în greutate valentine

În acest articol, descriem o metodă simplă și ieftină, folosind resurse disponibile în majoritatea laboratoarelor. Această metodă păstrează acidul nucleic și proteinele prin menținerea țesutului înghețat pe tot parcursul procesului. Creierele sunt tăiate în secțiuni de 0,5 până la 1,0 mm folosind o matrice cerebrală și așezate pe o placă de sticlă înghețată.

Reperele din fiecare secțiune sunt comparate cu o referință, cum ar fi Allen Mouse Brain Atlas, iar regiunile sunt disecate folosind un bisturiu rece sau un pumn de biopsie. Țesătura este apoi depozitată la ° C până la utilizare.

matricea regiuni în greutate mese ușoare sănătoase pentru a pierde în greutate

Prin acest proces mPFC de șobolan și șoarece, nucleul accumbens, hipocampul dorsal și ventral și alte regiuni au fost analizate cu succes folosind teste qRT-PCR cântând să vă ajute să pierdeți în greutate Western.

Această metodă este limitată la zonele creierului care pot fi identificate prin repere clare. Introducere Această lucrare ilustrează disecția regiunilor creierului înghețate pentru extracția proteinelor acide de înaltă calitate sau a acidului nucleic folosind o referință, cum ar fi Allen Mouse Brain Atlas 1, ca un ghid.

În această tehnică, creierele sunt înghețate și depozitate la oC matricea regiuni în greutate secțiunea ulterioară și disecție, în timp ce sunt menținute într-o stare înghețată. Acest proces permite cercetătorului să recolteze un număr mare de creiere într-o singură sesiune matricea regiuni în greutate să le disecă mai târziu pentru colectarea exactă din mai matricea regiuni în greutate regiuni ale creierului.

Colectarea exactă a regiunilor cerebrale de interes ROI este adesea necesară atunci când răspundeți la întrebări legate de expresia genelor și proteinelor.

matricea regiuni în greutate pierderea în greutate în jacksonville nc

În timp ce farmacologia, electrofiziologia și optogenetica pot fi utilizate pe rozătoare de tip sălbatic sau modificate genetic pentru a ajuta la elucidarea modificărilor moleculare care stau la baza comportamentelor observate 2, 3, 4, măsurarea modificărilor induse în transcriptomi și proteomi este adesea folosită pentru a susține aceste descoperiri.

Disecția cu micropunch pe țesutul înghețat nu este nouă. Primele lucrări ale lui Miklos Palkovits și alții descriu în detaliu tehnicile de bază 14, Această prezentare urmează în mare măsură lucrărilor inițiale, cu unele îmbunătățiri pentru a facilita eficiența și a reduce cheltuielile cu echipamentele necesare. De exemplu, secțiunile creierului sunt realizate într-un bloc cerebral înghețat, mai degrabă decât pe un criostat. Acest lucru produce secțiuni mai groase care reduc numărul de secțiuni necesare pentru colectarea probelor ROI.

Această metodă disecă și probele pe o placă de sticlă înghețată care se sprijină pe gheață uscată într-o cutie izolată. Aceasta produce o etapă de sub-îngheț pe bancă pentru a lucra. Secțiunile disecate în acest mod sunt ușor de manipulat, permițând cercetătorului să compare ambele părți ale fiecărei secțiuni cu o referință pentru a limita contaminarea regiunilor din afara ROI dorit. Avantajele acestui protocol sunt că 1 creierul este menținut într-o stare înghețată pe tot parcursul procesului, ceea ce ajută la conservarea proteinelor și a acidului nucleic și oferă cercetătorului timp pentru a recolta cu atenție AI și matricea regiuni în greutate reactivii necesari sunt ieftini și pot fi găsiți în majoritatea laboratoarelor de biologie moleculară.

În acest proces, creierele întregi sunt secționate la 0,0 mm într-o matrice cerebrală și plasate pe o placă de sticlă înghețată care este răcită continuu cu gheață uscată. Repere găsite în Allen's Brain Atlas 1 sau alte atlase cerebrale 16, 17 sunt utilizate pentru a identifica regiunile de interes, care sunt apoi disecate folosind un pumn rece sau bisturiu.

Matricea de greutate spațială cu efecte limită în R?

Abonament necesar. Vă rugăm să recomandați JoVE bibliotecarului dvs. Protocol Animalele utilizate în acest studiu au fost tratate într-o manieră etică și umană, după cum a raportat Comitetul instituțional de îngrijire și utilizare a animalelor IACUC de la Universitatea Indiana și Ghidurile naționale. NOTĂ: Toate uneltele și suprafețele trebuie spălate cu un solvent adecvat pentru a îndepărta nucleazele 18 înainte de a începe orice lucrare. Depozitarea creierului Îndepărtați rapid creierele de la șoareci de hârtie sălbatică CD1 adulți eutanasiați, cântărind aproximativ 30 g, utilizând o abordare convențională 13 și înghețați blițul timp de 60 de secunde în azot lichid sau izopentan pre-răcit cu gheață uscată.

Păstrați creierele înghețate la ° C în folie de aluminiu sau tuburi conice până la utilizare. Pregătirea matricei cerebrale Cu douăzeci și patru de ore înainte de disecarea țesutului, plasați o matrice cerebrală curată a se vedea tabel material pe un teanc de pachete de congelator dezghețate.

matricea regiuni în greutate utilizatorii de metale pierd greutatea

Îndepărtați părțile laterale ale matriței între două pachete de congelator, asigurându-vă că lăsați aproximativ 0,5 cm între partea inferioară a fantei de ras și partea superioară a pachetelor de gel Figura 1A.

Așezați folie de aluminiu pe capete pentru a facilita răcirea.

matricea regiuni în greutate pierderea de grăsime ces cest qui

NOTĂ: Când achiziționați o matrice cerebrală, cumpărați una care este suficient de mare pentru a cuprinde întregul volum al creierului care urmează să fie disecat.

Așezați cutia care conține matricea creierului și pachetele de congelator într-un congelator de oC cu partea superioară întredeschisă peste noapte.

Scheletul nuclear (matricea nucleară). Matrice nucleară a organelor cu membrană unică

Amplasarea unei plăci de sticlă congelate NOTĂ: Scopul acestei configurări este de a pregăti o suprafață înghețată pe care să disecăm secțiunile creierului. Secțiuni de disecție Abonament necesar. ARN-ul a fost analizat prin electroforeză capilară.

matricea regiuni în greutate cum să pierdeți grăsimea de pe laturile dvs

ARN degradat prezintă o pierdere a intensității benzilor ribozomale 28S și 18S și prezintă, de asemenea, produse de degradare, cum ar fi un frotiu între 25 și nucleotide Figura 5A, proba 1.

ARN de înaltă calitate prezintă benzi ribozomale distincte cu semnal redus sau deloc în regiunea cu greutate moleculară mai mică Figura 5A, proba 2. ARN izolat din probe folosind metoda de disecție înghețată a prezentat o bandă ribozomală puternică și valori RIN ridicate comparându-se foarte favorabil cu ARN preparat din țesuturi proaspăt recoltate Figura 5B.

Un avantaj al acestei metode este că un număr mare de creiere pot matricea regiuni în greutate recoltate rapid și stocate într-o singură sesiune pentru o disecție atentă la o dată ulterioară.

ROI-urile pot fi, de asemenea, stocate fără ca țesutul să fie dezghețat. Pentru a confirma acest punct, ARN-ul matricea regiuni în greutate fost extras din MPFC disecat care a fost depozitat timp de câteva săptămâni creierele recoltate au fost depozitate timp de câteva luni. Analiza Western blot a fost utilizată pentru a confirma integritatea proteică a mPFC congelat disecat așa cum s-a indicat anterior Punctele occidentale prezintă un semnal redus de la ținte cu greutate moleculară mare atunci când proteinele sunt degradate.

Produsele de degradare apar, de asemenea, ca un frotiu la greutăți moleculare mai mici în coloană. Pentru această analiză, proteinele au fost colectate, transferate în nitroceluloză și testate cu anticorpi împotriva unei ținte cu greutate moleculară ridicată, KCC2, și a proteinei cu matricea regiuni în greutate moleculară mai mică, actină Figura 5D.

În toate cazurile, benzile erau ascuțite și distincte, fără produse de aerisire perceptibile pentru KCC2 sau actină. În acest exemplu, secțiunile creierului înghețate sunt în stânga, cu plăci corespunzătoare din Atlasul creierului mouse-ului Allan din dreapta.

ROI-urile linii punctate roșii sunt identificate prin compararea reperelor vizibile forme negre cu Allen Mouse Brain Atlas. Repere includ: fa și cc, corp calos, aco, comisar anterior, VL, ventricul lateral, V3, al treilea venticul.

Imagini de la Crown Atlas pe credit: Allen Institute.

  1. Obiectivul de pierdere în greutate a grăsimii corporale
  2. MATRICEA EFI: CE EVALUEAZĂ, CUM SĂ O FACĂ, ANALIZĂ, EXEMPLU - ŞTIINŢĂ
  3. Obiectul suprarenale provoacă pierderea în greutate
  4. Scheletul nuclear (matricea nucleară). Matrice nucleară a organelor cu membrană unică
  5. Neurofibromatoza pierderea în greutate
  6. Rolul oaselor[ modificare modificare sursă ] Oasele, sau scheletul, au mai multe funcțiuni: Rol de pârghii ale aparatului locomotor.

Faceți clic aici pentru a vizualiza o versiune mai mare a acestei figuri. Figura 4: Disecarea ROI-urilor. LA Secțiunile sunt manipulate cu pense care sunt refrigerate periodic pe gheață uscată. Ambele părți ale fiecărei secțiuni ar trebui comparate cu imaginile corespunzătoare ale atlasului înainte de disecție. Discuţie Această lucrare descrie o tehnică de a izola regiuni specifice specifice ale creierului, limitând în același timp degradarea acidului nucleic și a proteinelor.

Deteriorarea țesutului cerebral apare rapid după moartea unui organism. Acest lucru se datorează în parte unei acumulări rapide de glutamat extracelular și a excitotoxicității care rezultă ARN Messenger este deosebit de vulnerabil la degradare 22, Degradarea proteinelor și a acidului nucleic este redusă dramatic la temperaturi scăzute, după cum reiese dintr-un articol recent care descrie activitatea biologică în celulele mamut înghețate matricea regiuni în greutate permafrost în urmă cu Cu metoda descrisă aici, creierele sunt înghețate și instrumentele și țesuturile sunt menținute sub îngheț până când se începe extracția acidului nucleic sau a proteinelor.

ROI-urile înghețate sunt apoi omogenizate într-un tampon care conține inhibitori de protează și nuclează, protejând moleculele țintă de degradare la temperaturi mai ridicate.

În acest proces, este important să se identifice repere clare pentru a identifica IDE-urile din secțiuni. Tractele de fibre ale comisurii anterioare și corpul calos funcționează bine în acest scop, la fel ca și ventriculii.

Os (anatomie)

Se pot utiliza și modificări ale formei hipocampului pe măsură ce se deplasează anterior spre posterior. În funcție de modul în care creierul este aliniat în matrice, reperele pot fi părtinitoare sau pot lipsi. Ar trebui să se acorde precauție înainte de a lua IPP din secțiuni precum aceasta, deoarece regiunile contaminante pot fi găsite în eșantion. Înainte de colectare, un ROI ar trebui să fie verificat pe ambele părți ale secțiunii pentru a se asigura că este consecvent pe toată secțiunea.

Disecția ROI este limitată la zone bine definite ale creierului care sunt mai mari de aproximativ 1 mm în dimensiunea x-y. La disecția ROI, este necesar să păstrați țesuturile înghețate fără a le face prea fragile.

Matricea EFI: ce evaluează, cum să o facă, analiză, exemplu

Țesuturile care sunt prea reci se vor fractura atunci când se aplică presiune cu un punte sau bisturiu. Regiunea de interes este adesea dificil de identificat din alte fragmente atunci când se produce acest lucru. O modalitate de a atenua acest lucru este să mutați scurt secțiunile într-o zonă mai caldă a plăcii departe de gheața uscată. De asemenea, este important să păstrați placa de sticlă curată. Odată ce o secțiune este procesată, placa trebuie curățată cu o lamă de ras înainte de a trece la următoarea.

În timp, apa se va condensa pe placa de disecție a aerului, care poate acoperi sau altfel poate interfera cu recunoașterea probei.

Referințe Matricea EFI Evaluarea factorilor interni este un instrument de management strategic utilizat pentru auditul sau evaluarea mediului intern al unei companii și pentru a dezvălui principalele puncte tari și puncte slabe din zonele funcționale ale unei afaceri. De asemenea, oferă o bază pentru identificarea și evaluarea relațiilor dintre acele zone. Matricea de evaluare a factorilor interni sau Matricea EFI este utilizată în formularea unei strategii. Fred R.

Curățarea plăcii se face prin răzuirea marginii ascuțite a unei lame de ras pe suprafața sticlei și ștergerea oricărui gel și a resturilor colectate. ROI-urile mici nu se pot distinge de fragmentele de creier nedorite, astfel încât menținerea unei zone de lucru curate este foarte importantă. Multe laboratoare folosesc produse comerciale pentru a proteja ARN-ul în țesuturile recoltate. În timp ce moleculele de laborator sunt bine conservate în acest fel, un dezavantaj este că morfologia țesutului este modificată drastic.

Prin urmare, poate fi dificil să găsești regiunile de interes folosind hărți de referință. Prin urmare, disecția AI din creierele înghețate înainte de a utiliza aceste produse poate fi o opțiune mai bună. Deși ne-am concentrat pe feliile coronale în această lucrare, această metodă ar trebui să funcționeze bine atât pentru secțiunile orizontale, cât și pentru cele sagittale.

Hărțile pentru aceste orientări au, în general, o rezoluție mai mică comparativ cu cele pentru secțiunile coronare. Cu toate acestea, acest lucru se schimbă rapid cu inițiativele unor grupuri precum Allen Brain Institute. O altă considerație este vârsta animalului la recoltare. Morfologia creierelor matricea regiuni în greutate de animale este foarte diferită de cea a adulților și va necesita un atlas specializat și o matrice cerebrală de dimensiuni diferite.

Resurse precum Atlas 26 pentru creierul șoarecilor în curs de dezvoltare sunt esențiale pentru colectarea probelor exacte de creier de la șoareci mai tineri. Această lucrare descrie un proces care poate fi folosit pentru recoltarea unor zone mici din creierul rozătoarelor.

Morfologia secțiunilor este bine conservată cu felierea înghețată și, deoarece țesuturile sunt menținute înghețate de la recoltare până la extracție, calitatea acidului nucleic și a proteinelor este ridicată.

Acest proces are avantajul față de disecția țesutului proaspăt colectat, că creierele de eșantion de la un grup mare de animale pot fi colectate și depozitate rapid.